Jena Bioscience：生物素（Biotin）和地高辛（Digoxin）

由于其的安全性、稳定性和便利性，半抗原生物素（Biotin）和地高辛（Digoxin）是用于生成用于原位杂交、基因表达分析或电泳迁移率变化实验（Electrophoretic Mobility Shift Assays，简称EMSA）的核酸探针的极为常见标签之一。

这些标签通过标记的核苷酸，可以直接（使用生物素化/地高辛化的核苷酸）或间接（通过合并带有活性基团的核苷酸类似物，随后进行生物素化/地高辛化）酶促反应引入到DNA和RNA中。随后，生物素标记的探针可以通过与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的链霉亲和素、碱性磷酸酶（AP）或荧光染料检测，而地高辛化通常通过HRP或AP修饰的抗体来可视化。

对于大多数应用来说，生物素是首选标签。然而，在某些情况下，生物样本中内源性的生物素可能会干扰检测，导致高背景或甚至假阳性。在这些情况下，建议使用地高辛，这是一种仅在洋地黄植物中存在的类固醇。

核酸标记是通过体外聚合反应实现的，例如聚合酶链反应（PCR）。四种天然脱氧核苷酸（dNTPs）或核苷酸（NTPs）中的一种（或多种）被部分替换为带有连接物的类似物，该连接物将标签连接到核苷酸部分的特定位置。这要求核苷酸类似物与聚合酶以及目标序列兼容。由于这种兼容性取决于：1）被替换的核苷酸类型和连接物附着位置，2）连接物的类型（结构）以及连接物的长度。

理论上，可能存在非常多的类似物。然而，在实践中，这被减少到一组已被证明对大多数都能产生良好标记结果的类似物。特别突出的类似物是在其5位被修饰的尿苷三磷酸，其次是5位被修饰的胞苷三磷酸，以及在7-去氮或N6位置有替换的腺苷三磷酸。关于连接物的类型（结构），脂肪族氨基烯丙基、炔丙基氨基和氨基己基连接物已被证明不会参与Watson-Crick碱基配对，因此能够产生良好的杂交结果。

除了连接物的结构，连接物的实际长度也显著影响探针的产量、标签的结合以及标签可视化的灵敏度和可重复性。一般来说，短连接物会产生丰富的探针产量，但可能会阻碍标签的结合和/或探针表面标签的充分可及性，而长连接物则会增加标签对检测试剂的可及性，但会导致探针产量降低。目标是在结合率和检测效率之间达到合适的平衡，这通常通过使用11个原子或16个原子的连接物来实现。

DNA/cDNA标记（DNA/cDNA Labeling）：

通过标准的酶促技术，如聚合酶链反应（PCR）、缺口翻译（Nick Translation）、引物延伸（Primer Extension）或末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal deoxynucleotidyl Transferase，简称TdT）介导的3'端标记和逆转录（cDNA探针），可以生成随机和定点生物素化/地高辛化的DNA和cDNA探针。DNA探针标记主要通过PCR、缺口翻译或引物延伸进行，并应用于原位杂交或DNA微阵列技术。3'端标记的典型应用包括TUNEL（凋亡的原位定位）或电泳迁移率变化实验（EMSA）实验。逆转录法标记cDNA通常用于基因表达分析的DNA实验中。

Jena Bioscience提供了多种具有不同连接体长度的半抗原标记的((d)d)NTP类似物，这使得能够为特定应用选择合适匹配的产品。

用于DNA标记的生物素化核苷酸：

用于DNA标记的地高辛/二硝基苯酚修饰的核苷酸：

特殊备注说明：

PCR: Polymerase chain reaction with Taq Polymerase（Taq聚合酶的聚合酶链式反应）;

NT: Nick Translation with DNAse I / DNA Polymerase I（DNA酶I/DNA聚合酶I的Nick翻译）;

Primer Extension: Primer Extension with Klenow 3'-5'exo-（Klenow 3'-5'exo-引物延伸法）;

3'-End Labeling: Incorporation with Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)（掺入末端脱氧核苷酸转移酶（TdT））;

RT: Reverse Transcription with Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase (MMLV RT)（用莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV RT）进行逆转录）.

1: in-house tested（内部测试）

2: external reference (see datasheet)（外部参考(见数据表)）

n/a: no data available（无资料）

- : not applicable（不适用） 

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