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Biogradetech:T细胞分选激活磁珠,CD3/CD28抗体偶联磁珠

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-12-27     
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几十年来,已经建立了许多体外刺激T细胞的方法,从不太特异的PHA促生物素,到更具针对性的抗CD3单克隆抗体,再到抗体包被的磁珠。其中大多数利用了T细胞生物学的优势,主要针对T细胞受体(TCR)的结合,启动足够的细胞内信号转导,推动有效的激活、增殖和分化。反过来,激活T细胞在基础研究和临床环境中具有多种用途。对激活T细胞的研究有助于详细了解生物学现象,如免疫应答的启动、细胞内信号传导、胸腺细胞发育和T细胞记忆形成,以及T细胞功能障碍或衰竭。刺激不仅允许免疫细胞的长期培养,包括选择和扩增单个细胞克隆,还可以提高基因修饰方法的效率。因此,T细胞激活也是基因工程T细胞制造过程中的一步,可实现高效的编辑和非克隆性扩增至临床意义的剂量,选择适当的T细胞刺激试剂以诱导足够的T细胞反应非常重要。 

现今典型的T细胞的刺激方法是基于至少双价抗CD3和抗CD28抗体的刺激。多价结合是必要的,因为仅结合TCR(定义为信号1)不会引起完全的T细胞激活,而是导致非响应状态。因此,除了TCR外,共刺激受体,尤其是CD28,必须提供支持性信号(称为信号2)。CD28介导的共刺激与TCR信号协同作用,促进细胞存活、克隆扩增和分化。  

T-Activator CD3.png

Biogradetech人的T激活剂CD3/CD28由与人CD3和CD28抗体包被的4.5um磁珠组成,为人的T细胞的分离和扩增提供了简单有效的方法。首先,该激活剂能够轻松地从外周血单个核细胞(PBMCs)中分离和浓缩CD3+ T细胞。在分离后,磁珠上的抗CD3和抗CD28抗体的共价结合提供了调节T细胞激活和扩增所需的初级和共刺激信号。在细胞扩增过程中,细胞培养需要额外添加其他细胞因子,如人IL-2、IL-7和IL-15,以更高效地激活细胞。经过10-13天的培养期,激活的细胞可以扩增1000倍。

货号名称规格应用
C-BETA2001-1mLHuman T-Activator CD3/CD28, Beads 人T 细胞激活磁珠,CD3/CD28抗体偶联磁珠1mLCAR-T等T细胞培养技术的应用
C-BETA2001-10mL10mL


实验步骤(简易汉化,请务必以英文原版说明书为准):

  1. 清洗T激活剂CD3/CD28抗体偶联磁珠

1.1将人T激活剂CD3/CD28磁珠悬浮于管中(涡旋离心30秒以上,或倾斜和旋转5分钟)。 

1.2将珠子转移到容器中。

1.3 加入等体积的PBS(含1% HSA)。如果珠子体积小于1mL,添加1mL含有1% HSA的PBS进行悬浮。 

1.4将管子放在磁铁上1分钟,然后弃掉上清液。 1.5将管子从磁铁上取下,然后用相同体积的PBS(含1% HSA)重新悬浮珠子。  


  1. 分离CD3+ T细胞:

2.1对于Ficoll分离的PBMCs,轻轻将细胞悬浮在PBS(含1% HSA)中,并将细胞密度调整为2-5×107个细胞/毫升。注意,细胞的总数不应超过2×108个细胞/毫升。 

注意:在开始之前,通过流式细胞术确定样品中CD3+ T细胞的百分比。 

2.2将洗涤的珠子与PBMCs以3(珠子):1(CD3+ T细胞)的比例加入,如果细胞是纯分离的T细胞,则将珠子与细胞的比例调整为1:1。 

2.3以50~120转/分钟的速度旋转样品,并在室温下孵育30分钟。 

2.4用T细胞培养基或含有1% HSA的PBS稀释珠子和细胞的混合物,以确保磁选的分离体积。然后将管子放在磁铁上1~2分钟。 

2.5移除上清液,然后用含有300 IU/mL IL-2的T细胞培养基重新悬浮珠子和细胞的混合物,并将细胞密度调整为0.5×10^6个细胞/毫升~1×10^6个细胞/毫升。 2.6将细胞悬浮液放入37℃、5% CO2的培养箱中。  


  1. T细胞的激活和扩增:

3.1每天从培养的第3天开始计算T细胞的数量。 

3.2在细胞扩增的后期,定期轻轻吹动培养中的细胞悬浮液,以分离珠子和细胞。 

3.3当CD3+ T细胞数目>1×10^6个细胞/毫升时,加入含有IL-2的T细胞培养基稀释细胞,并将细胞密度调整到约0.5×10^5个细胞/毫升。 

3.4在培养结束时(第9-14天),计算细胞数目,并用磁铁去除珠子。  


实验结果

C-BETA2001.png

分离CD3细胞:PBMC与CD3/CD28抗体偶联磁珠(货号C-BETA2001)按照3:1的比例孵育30分钟,然后用流式细胞术分析阳性(分离)部分的分离效率。


C-BETA2001-1.png

激活纯化的CD3+ T细胞:用CD3/CD28抗体偶联磁珠(货号C-BETA2001)激活纯化的人CD3+ T细胞, 孵育48小时后,用APC标记的抗人CD25抗体和PE标记的抗人CD69抗体对细胞进行荧光染色,并用流式细胞术进行分析。


C-BETA2001-2.png

纯化的CD3+T细胞扩增。用CD3/CD28抗体偶联磁珠(货号C-BETA2001)刺激纯化的人CD3+T细胞。细胞在含有3001U/mL IL-2的T细胞培养基中扩增。活化后的细胞扩增时间可达13天(左),细胞存活率较高(右)。   


Biogradetech是生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的供应商。他们提供广泛的产品组合,包括细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域的试剂。Biogradetech的产品受到生物研究机构和生物制药公司的高度追捧,他们以高质量、可靠性和服务而闻名。   


作为Biogradetech在中国的区域独家代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Biogradetech产品以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系我们!  


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