BMA Biomedicals：Calprotectin, Polyclonal, primary antibody

文献标题：The S100A8/A9 heterodimer amplifies proinflammatory cytokine production by macrophages via activation of nuclear factor kappa B and p38 mitogen-activated protein kinase in rheumatoid arthritis

DOI：10.1186/ar1939

研究背景

S100A8和S100A9是S100蛋白家族的两个成员，它们在中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞中以异二聚体复合物(S100A8/A9)的形式分泌。在类风湿性关节炎(RA)患者中，血清和滑液中的S100A8、S100A9和S100A8/A9水平较骨关节炎(OA)患者显著升高，其中S100A8/A9异二聚体更为常见。S100A8/A9在RA的滑膜组织(ST)中主要由浸润的CD68+巨噬细胞表达，并且与RA的炎症活动和关节炎症有关。

S100A8/A9异二聚体最初被鉴定为抗菌蛋白，在局部环境中表现出类似细胞因子的功能，特别是增强白细胞迁移到炎症部位和促进花生四烯酸(AA)向目标细胞的运输。然而，S100A8/A9的表面受体及其信号传导途径尚未完全阐明。S100A8/A9可能通过与肝素硫酸蛋白多糖和新型羧基化糖链等特定结合位点的相互作用，与内皮细胞表面结合。此外，CD36和晚期糖基化终产品受体(RAGE)是该复合物的两个可能的受体。

在RA患者中，炎症滑膜的特征是炎症细胞（主要是淋巴细胞和巨噬细胞）的浸润，滑膜成纤维细胞的增殖，以及血管增多。巨噬细胞在滑膜炎症和关节破坏的持续中起着关键作用，主要通过分泌如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1(IL-1)等促炎细胞因子。这些细胞因子通过激活转录因子NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应，诱导多种炎症介质和基质降解酶的合成。

研究方法

1.滑膜组织细胞的分离和培养：新鲜ST样本在RPMI 1640培养基中用胶原酶和DNase处理后，得到单细胞悬液，并在含有10%热灭活胎牛血清(FCS)的培养基中培养。培养72小时后收集培养上清液，并在-30°C下保存，直到进行S100A8/A9检测。

2.S100蛋白和细胞因子的免疫测定：使用商业ELISA试剂盒测定S100A8、S100A9和S100A8/A9的浓度。使用细胞计量珠阵列(CBA)和流式细胞仪分析测定单核细胞培养上清液中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12 p70浓度。

3.双色免疫荧光标记：使用抗S100A8/A9抗体和抗CD68抗体对RA ST样本进行双色免疫荧光标记，以确定S100A8/A9在RA ST中的表达。

4.单核细胞和体外分化巨噬细胞的刺激：从健康个体的肝素化PB样本中通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离单个核细胞(PBMCs)，然后使用单核细胞分离试剂盒II从PBMCs中纯化单核细胞。将单核细胞悬液在含有10% FCS的培养基中与或不与S100A8、S100A9和S100A8/A9共同孵育，并测定培养上清液中的细胞因子浓度。

5.RAGE和CD36阻断对S100A8/A9刺激的影响：在含有多粘菌素B的条件下，单核细胞悬液与或不与抗RAGE抗体、esRAGE、抗CD36抗体共同孵育，以评估这些受体在S100A8/A9刺激中的作用。

6.MAPK抑制剂和NF-κB抑制剂对S100A8/A9刺激的影响：单核细胞在含有MAPK抑制剂或NF-κB激活抑制剂的条件下与S100A8/A9共同孵育，以评估这些信号通路在S100A8/A9诱导的细胞因子产生中的作用。

7.p38 MAPK激活的检测：通过ELISA试剂盒测定单核细胞中p38 MAPK蛋白及其磷酸化形式的含量，以评估S100A8/A9对p38 MAPK激活的影响。

8.NF-κB激活的检测：通过电泳迁移率变化分析(EMSA)测定单核细胞中NF-κB的DNA结合活性，以评估S100A8/A9对NF-κB激活的影响。

研究内容

研究者发现在RA患者的血清和滑液中，S100A8、S100A9和S100A8/A9的水平较骨关节炎（OA）患者显著升高，尤其是S100A8/A9异二聚体形式。通过免疫荧光技术，研究者观察到S100A8/A9主要在RA患者的滑膜组织中的CD68+巨噬细胞中表达。研究发现S100A8/A9异二聚体和S100A9同源二聚体能够刺激纯化的单核细胞和体外分化的巨噬细胞产生如肿瘤坏死因子α（TNF-α）等促炎细胞因子。S100A8/A9介导的细胞因子产生被p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂显著抑制，且几乎完全被核因子κB（NF-κB）抑制剂抑制。这表明S100A8/A9通过激活NF-κB和p38 MAPK途径在RA中放大促炎细胞因子反应。来自RA患者的滑膜组织细胞在体外培养时自发分泌更多的S100A8/A9蛋白，这可能与RA患者关节内巨噬细胞的激活状态有关。探讨了S100A8/A9在RA病理生理过程中的作用，包括其在炎症细胞募集、花生四烯酸（AA）代谢以及与RA相关的信号通路激活中的角色。研究结果表明，S100A8/A9异二聚体可能是RA治疗的一个潜在靶点，通过抑制其活性或阻断其信号通路可能有助于减轻RA患者的炎症反应。这项研究为理解RA中的炎症反应提供了新的分子机制，并为开发新的治疗策略提供了可能的方向

Calprotectin, Polyclonal, primary antibody 货号：BMA-T-1526

抗体Calprotectin, Polyclonal, primary antibody在文献中主要被用于两个方面：

检测S100A8/A9蛋白：Calprotectin是S100A8和S100A9形成的异二聚体的另一个名称。在本文中，通过使用针对S100A8/A9复合物的多克隆抗体（例如，文中提到的27E10抗体），研究人员能够通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光技术检测RA患者血清和滑液中S100A8/A9的浓度。这些检测有助于评估RA患者的疾病活动性和炎症程度。

免疫荧光双标实验：研究人员使用S100A8/A9的多克隆抗体和CD68的抗体进行双色免疫荧光标记，以确定RA滑膜组织中S100A8/A9的表达位置和与CD68阳性巨噬细胞的共定位。这有助于揭示S100A8/A9在RA滑膜炎症中的作用及其在滑膜组织中的细胞来源。

综上所述，这些抗体在研究中扮演了关键角色，使研究人员能够检测和定位S100A8/A9蛋白，进而分析其在RA中的潜在作用和作为生物标志物的潜力。

抗体Calprotectin, Polyclonal, primary antibody，主要指的是针对Calprotectin（S100A8/A9异二聚体）的多克隆一抗，它们在多种研究和临床应用中具有重要作用。以下是这些抗体的一些主要应用：

1.基础研究：用于研究Calprotectin在细胞生物学、免疫学和病理学中的作用，特别是在炎症和免疫反应中的作用。

2.炎症性疾病的诊断：检测血清或组织样本中的Calprotectin水平，以辅助诊断如类风湿性关节炎（RA）、炎症性肠病、感染性疾病等。

3.疾病监测和治疗反应评估：监测Calprotectin水平的变化，以评估疾病活动度和治疗效果。

4.免疫组织化学：在组织切片上使用这些抗体来检测Calprotectin的表达和定位，有助于理解其在病理过程中的作用。

5.流式细胞术：用于分析Calprotectin在不同细胞群中的表达，有助于研究其在免疫细胞功能中的角色。

6.ELISA检测：用于定量测定生物样本中的Calprotectin水平，常用于研究和临床检测。

7.免疫沉淀和Western blot：用于研究Calprotectin与其他蛋白质的相互作用和信号传导途径。

8.药物开发：在药物筛选和开发过程中，用于验证Calprotectin作为药物靶点的潜力。

9.生物标志物研究：评估Calprotectin作为疾病标志物的潜力，以预测疾病风险、预后和治疗反应。

10.研究Calprotectin的生理功能：例如，其在细胞迁移、细胞分化和细胞死亡中的作用。

这些应用体现了Calprotectin抗体在生物医学研究和临床实践中的应用广泛性。