Biogradetech：Insect cell culture medium, serum-free (suspension culture) 昆虫细胞无血清悬浮生长培养基

昆虫细胞悬浮培养在生物学研究和应用中具有重要的生物学意义。比如： 

1.蛋白质表达和生产：昆虫细胞悬浮培养可用于大规模生产重组蛋白。昆虫细胞具有较高的蛋白质表达能力，并且能够正确地折叠和糖基化蛋白质。这使得昆虫细胞悬浮培养成为生产生物药物和研究蛋白质功能的重要工具。 

2.病毒研究：昆虫细胞悬浮培养可以用于病毒的研究和生产。某些昆虫细胞对于特定的昆虫病毒具有高度敏感性和感染性，这使得它们成为研究病毒感染机制、病毒生命周期以及病毒抗性的理想模型。 

3.细胞生物学研究：昆虫细胞悬浮培养可用于研究细胞生物学过程，如细胞分裂、细胞凋亡、细胞迁移和细胞信号传导等。通过对昆虫细胞的观察和实验操作，可以深入了解细胞的结构、功能和调控机制。 

4.毒理学研究：昆虫细胞悬浮培养可用于评估化合物的毒性和安全性。通过将化合物暴露给昆虫细胞，可以评估其对细胞的影响，如细胞存活率、细胞毒性和细胞损伤等。这有助于筛选和评估化合物的毒性潜力，并为药物发现和环境毒理学提供重要信息。    

总之，昆虫细胞悬浮培养在生物学研究中具有广泛的应用，可以用于蛋白质生产、病毒研究、细胞生物学研究和毒理学研究等领域。它们为我们理解生物学过程、开发新药物和评估化合物的安全性提供了有价值的工具和平台。   

作为Biogradetech在中国区域的独家代理，艾美捷科技将为中国客户提供全面的Biogradetech产品以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系我们。

A-EXO005本产品是一款昆虫细胞通用型无血清全悬浮培养基，可支持多种昆虫细胞高密度生长，具有倍增时间短、活率高、适用昆虫细胞种类广等特点。搭配Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统，在Hi Five昆虫细胞中可高效稳定表达多种蛋白。 

培养基使用方法

昆虫悬浮细胞培养环境

细胞培养条件：温度曲线：27℃±0.5℃、湿度曲线：70%±20%、无需CO₂、120rpm（振幅：25）。培养过程中需注意以下三点：

1） 保证摇床24小时正常运转； 

2） 防止外界环境温度过高，导致培养箱内温度失控； 

3） 防止培养箱内水盘缺水，导致培养箱内湿度过低。

培养基适应

1.直接适应：最初培养阶段，Hi Five细胞按初始密度0.5×10⁶cells/mL接种，SF9细胞按初始密度1.0×10⁶cells/mL接种，直接将培养基更换为昆虫细胞无血清悬浮生长培养基 (A-EXO005) 进行培养。待细胞培养2-3代，且生长稳定后进行后续实验。Hi Five细胞稳定生长时按0.5×10⁶cells/mL密度接种，SF9细胞稳定生长时按1.0×10⁶cells/mL密度接种，培养72h后均可达到5-7×10⁶ cells/mL，细胞活率≥90%。 

2.间接适应：A-EXO005培养基与细胞原培养基1：1混合培养细胞，连续传2-3代，细胞稳定生长后可将培养基更换为A-EXO005培养基，再传2-3代，细胞生长稳定后进行后续实验。Hi Five细胞稳定生长时按0.5×10⁶cells/mL密度接种，SF9细胞稳定生长时按1.0×10⁶cells/mL密度接种，培养72h后均可达到5-7×10⁶cells/mL，细胞活率≥90%。 

3.注意事项： 

3.1. 根据细胞具体情况选择进行培养基直接适应或者间接适应。 

3.2 细胞驯化初期，若出现密度低、结团等不稳定状态，根据密度选择合适的传代方式。 

a.稀释传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，去除多余细胞悬液并补加新鲜培养基。 

b.离心传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，去除上清，用新鲜培养基重悬细胞。 

4.细胞正常状态传代：

不同计数方式可能存在差异，建议使用Countstar细胞计数仪。 

昆虫悬浮细胞复苏：

预热培养基：取20mL的对应培养基置于27℃预热，保证预热充分。

将冻存管从液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速转移至37℃水浴中，快速摇晃，直至完全融化。

取预热好的培养基5mL于无菌离心管中，并将解冻后的细胞悬液移入此离心管中。800rpm离心5min（除去冻存液中DMSO）。

离心后弃去上清，用15mL预热好的培养基（保证较高细胞密度）重悬细胞，移至相应摇瓶，放于培养箱中悬浮培养。

昆虫悬浮细胞传代：

1.Hi Five细胞复苏初期传代：

细胞复苏后前两代，如果细胞密度＞2×10⁶ cells/mL，取部分细胞悬液离心传代，按初始密度0.8×10⁶ cells/mL接种；如果细胞密度≤2×10⁶ cells/mL，进行全部离心换液（细胞刚复苏会有细胞碎片，属正常现象）。

2.SF9细胞复苏初期传代：

复苏后2-3天取样计数，若细胞密度＜2×10⁶cells/mL以下，细胞不做任何处理，继续培养2-3天（复苏后4-6天），取样计数，若细胞密度2-5×10⁶cells/mL，直接向摇瓶中加入新鲜培养基将细胞密度调整至1×10⁶cells/mL左右，切忌不要离心传代，继续培养，若细胞密度＞5×10⁶cells/mL，可正常稀释传代。

3.Hi Five活细胞初期传代：

收到细胞后，将细胞转移至摇瓶中，取样计数并查看细胞状态，如果细胞密度＞2×10⁶ cells/mL，可以稀释传代，按0.8×10⁶ cells/mL接种；如果细胞密度≤2×10⁶ cells/mL，建议全部离心传代。（细胞经历运输过程会有细胞碎片，属正常现象）。

4.SF9活细胞初期传代：

收到细胞后，将细胞转移至摇瓶中，取样计数并查看细胞状态，如果细胞密度≥5×10⁶ cells/mL，可以稀释传代，按2×10⁶ cells/mL接种；如果细胞密度＜5×10⁶ cells/mL，继续培养1-4天，此期间需每24h取样计数查看细胞状态，当细胞密度≥5×10⁶ cells/mL，按2×10⁶ cells/mL接种，稀释传代，直至细胞恢复正常状态后，按1×10⁶ cells/mL接种。（细胞经历运输过程会有细胞碎片，属正常现象）。   

昆虫悬浮细胞冻存：

1.待细胞恢复至正常状态后，扩大细胞培养体积准备冻存建库。尽量多建细胞库，保证备份充足。

2.含血清冻存：选择处于对数生长期、活率＞90%细胞进行冻存，冻存细胞密度:15-20×10⁶cells/mL，推荐20×10⁶ cells/mL。

无血清冻存：选择处于对数生长期、活率＞90%细胞进行冻存，冻存细胞密度:30-40×10⁶ cells/mL，推荐40×10⁶ cells/mL。

3.准备冻存盒：向程序降温盒注入适量异丙醇，置于4℃冰箱预冷。

4.含血清细胞冻存液配制：冻存液=40%新鲜培养基+50%FBS(建议使用进口胎牛血清)+10%DMSO，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。

无血清细胞冻存液配制：冻存液=45%新鲜培养基+45%细胞培养上清+10%DMSO，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。

冻存液配制时，先加培养基再加血清或DMSO，防止DMSO浓度过高导致血清有效成分变性。

5.取细胞悬液，800rpm离心5min，弃去上清，用适量细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度至目标值。

6.快速分装细胞液至冻存管中。

7.将冻存管放入程序降温盒中，放于-80℃冰箱，24h后转至液氮罐中储存。一段时间后复苏检测。

看到这儿，您心动了吗？马上联系小艾吧！   

Biogradetech是全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商。他们提供广泛的产品组合，包括细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域的试剂。Biogradetech的产品受到全球生物研究机构和生物制药公司的高度追捧，他们以高质量、可靠性和服务而闻名。 Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。其产品均在严格的全球标准下生产，Biogradetech还提供专业的技术支持，帮助客户选择正确的产品，并正确使用产品。Biogradetech致力于为客户提供高质量的产品和服务，是那些寻求高质量试剂和可靠结果的人值得信赖的合作伙伴。 为了更好地满足亚太地区客户的需求并提升交付速度，Biogradetech在香港设立现货中心，将能更迅速地满足客户的需求，确保订单的高效处理，并加速产品的交付和配送，从而提供更快速、可靠的服务。   

作为Biogradetech在中国的区域独家代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Biogradetech以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系我们。