Chondrex: 完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂

1956年，Pearson等人发现用含有热杀死的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MT）颗粒的完全弗氏佐剂（Complete Freund's Adjuvant, CFA）免疫的大鼠，发展出多发性关节炎。这种被称为佐剂诱导性关节炎（Adjuvant-Induced Arthritis, AIA）的关节炎模型，以前被用作类风湿性关节炎（RA）的模型。然而，由于组织学和免疫学特征上的差异，AIA是反应性关节炎而非RA的更为恰当的模型。

佐剂诱导性关节炎(AIA)方案和预期结果

通过单次皮下注射含有10mg/ml MT（货号#7027）的CFA（0.05-0.1ml），可以轻易地在易感大鼠品系中诱导出AIA（根据研究目的，选择足垫或尾基部注射）。每次注射前，必须重新悬浮佐剂，因为分枝杆菌颗粒会沉淀。未能重新悬浮佐剂可能导致分枝杆菌颗粒分布不一致。

1) 足垫注射

将含有10mg/ml MT的CFA 0.05ml皮下注射到后脚的足垫中。注射后30分钟内将观察到严重和急性炎症。炎症在3-4天内达到高峰，并持续20-25天。非注射爪通常在注射后12-14天内出现继发性关节炎。关节炎在发病后2-3天内达到高峰，并持续20至25天。

2) 尾基部注射

在尾基部皮下注射含有10mg/ml MT的CFA 0.1ml。关节炎将在注射后12-14天内出现在一个或所有爪子中，并持续20至25天。

图1. 使用大鼠AIA模型评估抗炎药物: 在第0天，通过在SD大鼠的右后爪足垫注射0.05ml CFA（10mg/ml MT），诱导了AIA。注射后爪子立即出现严重炎症。在注射后第12-14天，左后爪足垫发展出继发性关节炎。通过比较处理和未处理大鼠的足垫体积，确定了抗炎测试化合物的效果。

Chondrex可提供含有10和20mg/ml特制热杀死的MT的完全弗氏佐剂（CFA）（货号#7027和7024）。然而，含有1mg/ml MT的CFA很少能有效诱导AIA。为了有效诱导，推荐使用含有10mg/ml MT的CFA，尽管含有5mg/ml MT的CFA也能够诱导AIA。

将CFA悬浮后，将其吸入一个连接到25号针头的1ml玻璃注射器中。建议在为每只大鼠注射前，通过在手中滚动注射器来重新悬浮CFA。

评估佐剂诱导性关节炎(AIA)

1. 临床关节炎评分: 可以通过视觉检查对关节炎的严重程度进行评分。Chondrex建议对每个爪子的关节炎进行0到4分的评分。评分建议如下，供参考。尾基部注射方法对所有四个爪子的关节炎进行评分（最高得分16分），而足垫注射方法对三个爪子的关节炎进行评分，不包括注射佐剂的爪子（最高得分12分）。

2. 爪子厚度和体积评估：可以通过测量爪子的厚度和体积，客观确定与关节炎严重程度相关的足部肿胀。可以使用卡尺测量爪子厚度，而爪子体积可以使用体积描记仪进行测量。图1提供了通过测量爪子体积来评估抗炎药物的样本数据。

3. 局部高温评估：局部高温是急性炎症反应严重程度的非常准确的指标，因其简单和敏感性而强烈推荐。在进行这种测量时，可以使用接触式温度计测量每个爪子的表面温度。

4. 细胞因子和趋化因子分析：在AIA大鼠中，血清和爪子提取物中的细胞因子和趋化因子水平可能与炎症状态相关，并在尤其是急性和慢性炎症阶段显示出不同的特征。此外，抗炎治疗会改变这些细胞因子和趋化因子的水平。为了评估这些动态变化，必须根据标志物在适当的时期制备样本。