Biotium：活死细菌染色试剂盒

前情回顾：Biotium：微生物(细菌，真菌&酵母)荧光染色及活力检测全套工具 

产品描述：

Biotium的Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells(30027)通过两个DNA探针DMAO和EthD-III对活细菌(绿色)和死细菌(红色)进行双色荧光染色。DMAO 是一种绿色荧光核酸染料，可对活细菌和死细菌进行染色。Ethidium Homodimer III (EthD-III) 是一种红色荧光核酸染料，可选择性地对细胞膜受损的死细菌进行染色。当用 DMAO 和 EthD-III 的混合物染色时，细胞膜完整的细菌会发出绿色荧光，而细胞膜受损的细菌会发出红色荧光。该试剂盒适用于荧光显微镜和流式细胞仪。检测原理是通用的，适用于大多数细菌类型。用于100次流式细胞检测或1000次显微镜检测。 

特征：

• 检测同一细胞群中的活细胞和死细胞

• 简单、快速的免洗染色

• 用于荧光显微镜或流式细胞术

产品推荐：

DMAO，5 mM 溶液(2 x 100 uL) 

EthD-III，2 mM 溶液(2 x 150 uL)  

1、储存和处理在4℃下避光储存，按推荐储存条件，产品的稳定期限至少为收到日期后的2年。DMAO和EthD-III染料与核酸结合。

2、光谱特性DMAO：Ex/Em：503/530nm（与DNA共存时） 乙溴化二聚体III（EthD-III）：Ex/Em：532/625nm*（与DNA共存时） *EthD-III在279nm处也有强烈的紫外吸收峰

3、分析方案

1）荧光显微镜染色方案

• 将染料储备溶液加热至室温，并振荡混合。

• 通过将1微升DMAO、2微升EthD-III和8微升150毫摩尔氯化钠（参见分析注意事项＃2）组合，制备100倍浓度的染色溶液。振荡以确保充分混合。 注意：根据需要，体积可以按比例调整。

• 在微离心管中，通过以10,000 x g离心5分钟并去除上清液来收集细菌细胞。

• 可选：用150毫摩尔氯化钠洗涤细胞一次，通过上下移液数次。

• 通过以10,000 x g离心5分钟并去除上清液来沉淀细菌细胞。

• 在150微摩尔氯化钠中重新悬浮细胞100微升。

• 向100微升细菌悬浮液中加入1微升染料混合物。

• 轻轻混合，并在避光条件下室温孵育15分钟。

• 将样品中的5微升转移到玻片上，涂上玻璃盖片，并用CoverGrip Coverslip Sealant（23005）或指甲油密封。

• 通过荧光显微镜对标记的细胞进行成像。DMAO可以使用FITC滤光片组进行成像，EthD-III可以使用Texas Red?或Cy?3滤光片组进行成像。

2）流式细胞术染色方案

①. 按照上述荧光显微镜染色方案的步骤①-⑧进行操作。 

注意：我们建议还制备仅用DMAO染色的死细胞和仅用EthD-III染色的死细胞的单染细菌样品。 

②. 加入0.5ml流式细胞术分析中的常用缓冲液。 

③. 进行流式细胞术分析，检测FITC通道中的DMAO，以及PE或PE-Texas Red?通道中的EthD-III。