Echelon Biosciences：PIP脂质蛋白结合芯片PIP Array

通过前期PIP Strips筛选，我们可以确定目标蛋白与8种磷酸肌醇及其它7种重要磷脂是否存现结合。如果目标蛋白与8种磷酸肌醇存在结合，如何进一步检测其结合强度或者结合灵敏度呢?

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PIP Array – Lipid-Protein Interaction Assay

PIP Array是一种4 x 5 cm的疏水膜，包含8种磷酸肌醇，提供7种含量的标准品：100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56 pmol。通过一个简单的蛋白质-脂质覆盖实验来确定脂质-蛋白质之间的相互作用强度和灵敏度。

*** 该PIP脂质蛋白结合芯片产品仅用于科研实验.

• PIP Array，PIP脂质蛋白结合芯片斑点分布：

*膜的左上角有一个对角线切口，Ponceau S染色（粉红色）被添加到脂质点上，以帮助定位。阵列的方向，脂质的位置见上面的模板。所有的脂质都是长链（diC16）的高纯度合成物。

• PIP Array, Nature/Cell文章鉴赏：

①Nature文章：Tan, Shutang et al. "The lipid code-dependent phosphoswitch PDK1-D6PK activates PIN-mediated auxin efflux in Arabidopsis". Nature plants vol. 6,5 (2020): 556-569. doi:10.1038/s41477-020-0648-9.

【摘要】植物激素生长素通过极性运输在体内呈现不对称分布，参与了不同生长发育过程的调控，生长素的分布还被环境信号所调控，介导植物向性生长等。生长素输出载体PIN (PIN-FORMED) 家族蛋白调控了生长素分布，参与多种生理活动的调节。研究表明PIN蛋白定位及活性受到囊泡运输等调节，同时还存在蛋白磷酸化等翻译后修饰， AGC家族成员PINOID、D6PK和PAX等通过磷酸化PIN调控其极性定位或活性，尽管生化分析表明PDK1可以磷酸化PINIOD，但其是否参与PIN介导的生长素极性运输仍不清楚。细胞学观察表明，PDK1.1和PDK1.2定位于细胞质和细胞膜上，在膜上呈现明显的极性分布。生化分析表明，PDK1.1和PDK1.2可以结合多种不同的磷脂分子，且这种结合对PDK1.1和PDK1.2的极性定位非常重要。

② Cell文章：Wang, Ying Jie et al. "Phosphatidylinositol 4 phosphate regulates targeting of clathrin adaptor AP-1 complexes to the Golgi". Cell vol. 114,3 (2003): 299-310.

doi:10.1016/s0092-8674(03)00603-2

【摘要】磷脂酰肌醇 4 磷酸 [PI(4)P] 对酵母分泌至关重要，但其在哺乳动物细胞中的作用尚不清楚。当前的范式提出 PI(4)P 主要作为磷脂酰肌醇 4,5 二磷酸 (PIP2) 的前体，这是一种重要的质膜调节剂。我们发现 PI(4)P 在哺乳动物高尔基体中富含，并使用 PI4KIIalpha（一种高尔基体磷脂酰肌醇 4 激酶）的 RNA 干扰 (RNAi) 来确定 PI(4)P 是否直接调节高尔基体。 PI4KIIalpha RNAi 降低高尔基体 PI(4)P，阻止网格蛋白适配器 AP-1 复合物向高尔基体的募集，并抑制依赖于 AP-1 的功能。通过添加回 PI(4)P，可以挽救这种 AP-1 结合缺陷。此外，纯化的 AP-1 结合 PI(4)P，抗 PI(4)P 抑制细胞溶质 AP-1 向正常细胞膜的体外募集。我们建议 PI4KIIalpha 通过生成指定 AP-1 外套机械对接的富含 PI(4)P 的域来建立高尔基体独特的脂质定义的细胞器身份。

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Nature/Cell 已发表文章：

• Tan, Shutang et al. "The lipid code-dependent phosphoswitch PDK1-D6PK activates PIN-mediated auxin efflux in Arabidopsis". Nature plants vol.6,5 (2020): 556-569.

• Li, Xiaoxue et al. "Renal Purge of Hemolymphatic Lipids Prevents the Accumulation of ROS-Induced Inflammatory Oxidized Lipids and Protects Drosophila from Tissue Damage". Immunity vol. 52,2 (2020): 374-387.e6.

• Levin-Konigsberg, Roni, et al. "Phagolysosome resolution requires contacts with the endoplasmic reticulum and phosphatidylinositol-4-phosphate signalling." Nature cell biology 21.10 (2019): 1234-1247.

• Lin, Aifu, et al. "The LINK-A lncRNA interacts with PtdIns (3, 4, 5) P 3 to hyperactivate AKT and confer resistance to AKT inhibitors." Nature cell biology 19.3 (2017): 238-251.

• Islam, Kazi T., et al. "A novel bi-domain plant defensin MtDef5 with potent broad-spectrum antifungal activity binds to multiple phospholipids and forms oligomers." Scientific reports 7.1 (2017): 1-13.

• Wang, Ying Jie et al. "Phosphatidylinositol 4 phosphate regulates targeting of clathrin adaptor AP-1 complexes to the Golgi". Cell vol.114,3 (2003): 299-310.

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