BPS Bioscience：一步法荧光素酶测定系统

荧光素酶（Luciferase）是一类能够催化发光反应的氧化酶的总称，这一过程被称为生物发光。萤火虫荧光素酶在报告细胞中表达，催化D-荧光素转化为氧荧光素，同时使用ATP作为共底物，并在Mg??存在下产生发光。发光的量与反应中存在的荧光素酶量成正比，发光量通过发光检测仪读取。

BPS bioscience的一步法荧光素酶测定系统旨在用于高通量、灵敏地定量检测哺乳动物细胞培养中的萤火虫荧光素酶活性。该试剂由两个组分构成，即荧光素酶试剂缓冲液（组分A）和荧光素酶试剂底物（组分B）。组分A和组分B混合后形成工作溶液，其中包含了细胞裂解和荧光素酶定量所需的所有必需试剂。

操作步骤：

1. 将荧光素酶试剂缓冲液（组分A）在室温水浴中解冻，使用前平衡至室温并充分混合。

2. 计算实验所需的荧光素酶试剂量（组分A + 组分B）。立即在实验前，将荧光素酶试剂底物（组分B）以1:100的比例稀释到荧光素酶试剂缓冲液（组分A）中，并充分混合。避免暴露于过多光线。

3. 从培养箱中取出含有表达荧光素酶的细胞板。注意：板必须与所使用的发光检测仪兼容。

4. 将荧光素酶测定工作溶液（组分A + 组分B）直接添加到培养基中，体积与培养基体积相等。例如，96孔板中每孔含有100ul培养基，则需加入100ul/孔的工作溶液。

5. 在室温下轻轻摇动板至少15分钟。使用发光检测仪测量荧光素酶活性。在此条件下，信号在室温下可稳定超过两小时。为获得最大光强度，建议在添加试剂后1小时内测量样品。

实验结果

BPS bioscience的一步法荧光素酶测定系统（左）与其他品牌的荧光素酶试剂（右）的比较：JAK/STAT信号通路ISRE报告基因HEK293细胞（BPS Bioscience #60510）被种植在96孔板中，并用IFNα处理或不用IFNα处理以激活JAK/STAT信号通路。第二天，向细胞中添加荧光素酶试剂，并在试剂添加后15分钟测量发光。数据以背景减去后的发光值表示。

BPS bioscience的一步法荧光素酶测定系统在荧光素酶报告细胞中产生明亮且稳定的发光，可持续数小时。JAK/STAT信号通路ISRE报告基因HEK293细胞（BPS Bioscience #60510）被种植在96孔板中，并用IFNα处理或不用IFNα处理。第二天，向细胞中添加荧光素酶试剂，并在试剂添加后5分钟至2小时内测量发光。数据以背景减去后的发光值表示。