泛素-蛋白酶系统

泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system, UPS)是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80%以上蛋白质的降解。泛素-蛋白酶体系统降解蛋白的途径包括两个主要阶段。第一阶段为泛素与蛋白底物的相互作用，第二阶段为蛋白酶体对底物的降解。

一、泛素-蛋白酶体系统

泛素-蛋白酶体系统由以下几个组分构成：①泛素，②泛素活化酶E1，③泛素结合酶E2，④泛素连接酶E3，⑤蛋白酶体（2.5MDa）

二、双泛素底物

泛素-蛋白酶体（ubiquitin-proteasome system，UPS）途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制。负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统。泛素启动酶系统负责活化泛素，并将其结合到待降解的蛋白上，形成靶蛋白多聚泛素链，即泛素化。蛋白酶体系统可以识别已泛素化的蛋白并将其降解。此外，细胞内还有另一类形成反向调节的解离泛素链分子的蛋白酶——去泛素化酶(Deubiquitinase，DUB)。

三、全泛素及多聚泛素链

根据蛋白底物所添加泛素分子数目的不同，泛素化修饰分为单泛素化修饰和多泛素化修饰。为您提供针对各种位点突变以及带有不同标记的泛素重组蛋白：

四、去泛素化酶(DUB)

去泛素化酶是一类数量很大的蛋白酶家族，人类基因组编码大约100个去泛素化酶，主要分为五个家族，分别是泛素羧基末端水解酶（UCH）家族，泛素特异性蛋白酶（USP/UBP）家族，Otubaim（OTU）家族，Josephin结构域蛋白家族及JAMM家族。

五、分离富集泛素化蛋白

基于UBD对泛素的高亲和力，泛素研究专家LifeSensors已开发出利用串联泛素结合实体（Tandem Ubiquitin Binding Entities，TUBE）从细胞和组织裂解液中特异性分离富集泛素化蛋白的技术。TUBEs由多个UBDs串联构成，对泛素链亲和性极高，而且，TUBEs通过与泛素链的结合可以保护蛋白质不被去泛素化，同时避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解，为研究泛素化蛋白质组学提供了很好的工具。

六、如何判断蛋白是否泛素化? 是哪种类型的泛素化修饰？

UbiTest检测原理：先通过TUBEs富集纯化样本中的泛素化总蛋白，随后，将分离到的泛素化蛋白经或者不经去泛素化酶DUBs处理，（+）/（-）DUBs处理的蛋白样本用靶蛋白的特异性抗体进行免疫印迹（WB）分析，通过条带比对分析实现对泛素化蛋白的定性及半定量检测。