基因克隆技术是分子生物学的核心技术,分子克隆指的是在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子,构成遗传物质的新组合,使之进入宿主细胞内并获得持续稳定增殖能力和表达。基因克隆技术的发展经历3个阶段:
第一阶段为经典的T4 DNA连接酶介导的TA克隆及粘性末端克隆;
第二阶段为基于DNA修饰酶的LIC系列克隆;
第三阶段为基于DNA重组酶的Gateway克隆及一步法克隆。
1、即用型表达克隆,构建表达载体所用的酶以及中间载体
提供140,000个预制即用型Nextday-ORF 克隆。无需再等上数日/数周即可马上进行基因表达或蛋白表达实验。每一个Nextday-ORF?克隆均经过序列验证,次日寄送,且多种病毒、非病毒类载体可选。
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2、转染试剂
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法)、生物介导(病毒介导转染、原生质体转染)。
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3、构建表达载体
Gateway克隆技术作为一种可以快速、高效将DNA序列转移到载体上的克隆方法,Gateway技术依赖于下面描述的两个反应:BP反应和LR反应,通过BP反应获得入门克隆(有时候我们也说中间克隆),再通过LR反应将目的DNA以正确的方向连接到各种目的载体上,形成不同的表达载体。向大家介绍BP反应-构建入门载体和LR反应-构建表达载体:
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4、荧光素酶
荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。
其中要介绍有:1、萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase);2、海肾荧光素酶(Renilla luciferase);3、Gaussia 分泌型荧光素酶;4、分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)
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详情查看:2、神奇的分泌型荧光素酶(二),知否知否 |
产品推介:
1、构建表达载体所用的酶以及中间载体
货号 | 载体名称 | 规格 | 描述 |
RCBM-1001-020 | EZRecombinase LR Mix | 20次反应 | 催化attL x attR重组反应,高效率酶,与Gateway 克隆技术完全兼容 |
RCBM-1001-100 | 100 次反应 | ||
RCBM-1002-020 | EZRecombinase BP Mix | 20次反应 | 催化attB x attP重组反应,高效率酶,与Gateway?克隆技术完全兼容 |
RCBM-1002-100 | 100 次反应 |
货号 | 载体名称 | 规格 | 类型 |
EZ001 | pEZ-Lv199 | 10ug | 慢病毒表达载体 |
EZ003 | pEZ-Lv233 | 10ug | |
EZ004 | pEZ-Lv195 | 10ug | |
EZ006 | pEZ-Lv201 | 10ug | |
EZ007 | pEZ-M02 | 10ug | 哺乳动物细胞表达载体 |
EZ008 | pEZ-M13 | 10ug | |
EZ009 | pEZ-M67 | 10ug | |
EZ010 | pEZ-M68 | 10ug | |
EZ011 | pEZ-M98 | 10ug | |
EZ012 | pEZ-SH01 | 10ug | Human Safe Harbor载体 |
EZ013 | pEZ-SH02 | 10ug | Mouse Safe Harbor载体 |
EZ014 | pEZ-B01 | 10ug | 大肠杆菌表达载体 |
EZ015 | pEZ-B02 | 10ug | |
EZ016 | pEZ-Lv235 | 10ug | 慢病毒表达载体 |
EZ017 | pEZ-Lv236 | 10ug | |
EZ018 | pEZ-Lv237 | 10ug | |
EZ019 | pEZ-Lv238 | 10ug | |
EZ021 | pEZ-P002 | 10ug | 植物表达载体 |
EZ023 | pEZ-P004 | 10ug | |
EZ026 | pEZ-P007 | 10ug | |
EZ027 | pEZ-P008 | 10ug | |
EZ029 | pEZ-P010 | 10ug | |
EZ030 | pEZ-P011 | 10ug | |
EZ031 | pEZ-P012 | 10ug | |
EZ032 | pEZ-P013 | 10ug | |
EZ033 | pEZ-M06 | 10ug | 哺乳动物细胞表达载体 |
EZ034 | pEZ-M09 | 10ug | |
EZ035 | pEZ-M12 | 10ug | |
EG001 | pShuttle-D01 | 10ug | 穿梭载体 |
EG002 | pShuttle-D02 | 10ug |
2、转染试剂
货号 | 名称 | 适用性 |
EndoFectin? Max转染试剂 (1 mL) | 广泛适用于多种细胞 | |
EndoFectin? Max转染试剂 (3 mL) | ||
CRISPR-Fectin? 转染试剂 (1 mL) | 优化的CRISPR-Cas9核蛋白专用的转染试剂。可与GeneHero? Cas9蛋白配合使用 | |
EndoFectin? Expi293 转染试剂 (1 mL) | 专注转染悬浮细胞293F,转染效率极高 | |
EndoFectin? Expi293 增强转染试剂盒 (1L 转染用量) | ||
EndoFectin? Expi293 增强转染试剂盒 (10L 转染用量) | ||
EndoFectin? HepG2 转染试剂 (1 mL) | 为常用细胞系HepG2进行优化设计 | |
EndoFectin? HepG2 转染试剂 (3 mL) | ||
EndoFectin? Lenti转染试剂 (1 ml) | 转染293T细胞,可收获更高滴度的慢病毒 | |
EndoFectin? Lenti转染试剂 (3 ml)) |
3、BP反应-构建入门载体和LR反应-构建表达载体
货号 | 名称 | 说明 |
RCBM-1002-020 | EZRecombinase? BP Cloning Kit (20 rxn) | Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反应) |
RCBM-1002-100 | EZRecombinase? BP Cloning Kit (100 rxn) | Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反应) |
RCBM-1001-020 | EZRecombinase? LR Cloning Kit (20 rxn) | Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反应) |
RCBM-1001-100 | EZRecombinase? LR Cloning Kit (100 rxn) | Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反应) |
4、荧光素酶
货号 | 产品名称 | 产品特性 | 荧光素酶 | 规格 |
LF001 | Luc-Pair? Duo-Luciferase Assay Kit 2.0 Hot ! | 稳定型 | 萤火虫(Fluc) 海肾(Rluc) | 100rxns |
LF002 | 300rxns | |||
LF003 | 1000rxns | |||
LF004 | Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit Hot ! | 高灵敏型 | 萤火虫(Fluc) 海肾(Rluc) | 100rxns |
LF005 | 300rxns | |||
LF006 | 1000rxns | |||
LF007 | Luc-Pair? Firefly Luciferase HS Assay Kits | 高灵敏型 | 萤火虫(Fluc) | 100rxns |
LF008 | 300rxns | |||
LF009 | 1000rxns | |||
LF010 | Luc-Pair? Renilla Luciferase HS Assay Kit | 高灵敏型 | 海肾(Rluc) | 100rxns |
LF011 | 300rxns | |||
LF012 | 1000rxns | |||
LF013 | Luc-Pair? Duo-Luciferase HT Assay Kit | 稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析 | 萤火虫(Fluc) 海肾(Rluc) | 10mL |
LF014 | 30mL | |||
LF015 | 100mL | |||
LF016 | Luc-Pair ? Firefly Luciferase HT Assay Kit | 稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析 | 萤火虫(Fluc) | 10mL |
LF017 | 30mL | |||
LF018 | 100mL | |||
LF019 | Luc-Pair? Renilla Luciferase HT Assay Kit | 稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析 | 海肾(Rluc) | 10mL |
LF020 | 30mL | |||
LF021 | 100mL |
荧光素酶报告基因载体:
货号 | 产品 | 启动子 | 报告基因 | 示踪基因 | 筛选标记 | 抗性 | 研究 |
ZX001 | pEZX-FR01(10?g) | N/A* | Firefly (hLuc) | Renilla (Rluc) | Puromycin | Kanamycin | 常规启动子等研究 |
ZX002 | pEZX-FR02(10?g) | SV40 | Firefly (hLuc) | Renilla (Rluc) | N/A* | Ampicillin | UTR靶标等研究 |
ZX003 | pEZX-FR03(10?g) | miniCMV | Firefly( hLuc) | Renilla (RLuc) | Puromycin | Kanamycin | 转录因子结合位点等研究 |
货号 | 名称 | 规格 | 产品特性 |
LF031 | Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit | 100rxns | 无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc 和SEAP酶活性 |
LF032 | 300rxns |
分泌型单荧光素酶检测试剂盒
货号 | 名称 | 规格 | 产品特性 |
LF061 | Secrete-PairTM Gaussia Luciferase Assay Kit | 100rxns | 无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc的酶活性 |
LF062 | 1000rxns |
荧光素酶报告基因载体:
货号 | 产品 | 描述 | 规格 |
ZX101 | pEZX-GN01 | pEZX-GN01 包含Gluc和SEAP的报告载体 | 10?g |
ZX102 | pEZX-GN03 | pEZX-GN03 包含Gluc和SEAP的报告载体 | 10?g |
ZX103 | pEZX-GA01 | pEZX-GA01 包含Gluc和SEAP的报告载体 | 10?g |
ZX104 | pEZX-GA02 | pEZX-GA02 包含Gluc和SEAP的报告载体 | 10?g |
ZX105 | pEZX-GA03 | pEZX-GA03 包含Gluc和SEAP的报告载体 | 10?g |
ZX106 | pEZX-LvGN01 | pEZX-LvGN01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral) | 10?g |
ZX107 | pEZX-LvGA01 | pEZX-LvGA01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral) | 10?g |
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