进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?

发布者:艾美捷科技发布时间:2010-02-10

 

      要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物,确实是有一定的不确定性的。所以,严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用的。

      我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。艾美捷向您推荐使用内参抗体来检测您的实验系统,或者校准您的实验结果。内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

     实验结果分析其实很简单:如果样品蛋白量有限,只够进行一次电泳转膜实验时,分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量,得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量,再用此数值进行样品间的比较和分析,得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分,可以先检测内参,观测样品间内参显色条带是否一致,根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验,至内参量一致为止;若内参一致,即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点,但是可以保证结果更有说服力,更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。

     常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin,这其中最近的国外文献报道中使用GAPDH内参的较多。对于一些植物的样本,则需要特别的植物Actin蛋白作为内参;同样的,如果提取的样本是细胞核蛋白,那么PCNA或者组蛋白H3都是被经常使用的;而针对一些研究线粒体的客户,那么Cox IV则被较多的文献引用作为线粒体总蛋白的内部参考。美国Abbkine品牌提供非常完整的内参产品解决方案,艾美捷公司向您推荐进口Abbkine全系列内参抗体产品,相关产品如下:

 

内参抗体名称 内参类型 观察分子量 品牌 货号 详情
Beta-Actin mAb (1C7)  细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01010 小鼠源单克隆
Beta-Actin mAb (1C7) , HRP 细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01015 小鼠源单克隆,HRP偶联
GAPDH mAb (2B5)  细胞总蛋白 36 kD Abbkine A01020 小鼠源单克隆
GAPDH mAb (2B5) , HRP 细胞总蛋白 36 kD Abbkine A01025 小鼠源单克隆,HRP偶联
Beta-Tubuline mAb (3G6) 细胞总蛋白 55 kD Abbkine A01030 小鼠源单克隆
Plant Actin mAb (3T3) 植物细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01050 小鼠源单克隆
PCNA mAb (1D7) 细胞核蛋白 28 kD Abbkine A01040 小鼠源单克隆
COX IV mAb (14Y2) 细胞线粒体总蛋白 16 kD Abbkine A01060 小鼠源单克隆
Histone H3 mAb (2D10) 细胞核蛋白 18 kD Abbkine A01070 小鼠源单克隆

 

美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌,艾美捷将其引入中国,作为其中国区域代理,将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂,如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗,抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或 区域代理,艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣,请致电全国免费电话400-6800-868 转801/802/803  或者027-84454412/4876到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。

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