艾美捷告诉您如何选择合适的二抗分子类型?

发布者:艾美捷科技发布时间:2011-03-26

 

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶、荧光素或生物素等耦联标记。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体(如IgGIgMIgA等)均具有反应性,因而使用标记的二抗可以免去对每个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。通常情况下,某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择,如何能选择到最适合该实验的二抗,需要综合以下几个方面进行考虑:

 

1.     选择全IgG形式还是F(ab’)2片段,或者Fab片段二抗
 

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    全IgG形式的二抗是从抗血清中分离出来的完整的分子;这些抗体有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分,因此是二价的,也是性价比最高的。 F(ab’)2片段形式的二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分,剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分,依然是二价的;该抗体可避免与Protein A /G或与Fc受体的结合, 还由于其分子本身比较好,更容易渗透入细胞组织结构内而灵敏度更高 。Fab片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的;Fab片段抗体由于只含有一个结合位点,可用来封闭内源性的免疫球蛋白。

 

2.     根据一抗的种属来源和类型选择二抗

 

        二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果一抗是小鼠源的抗体,二抗则选抗小鼠的二抗;如果一抗是从兔血清里制备的兔源抗体,则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。另外,二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1IgG2aIgG2bIgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。艾美捷科技能为您提供最全种属的二抗产品。

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3.     根据实验要求的特异性进一步筛选二抗

        Anti-IgG (H+L)是最常用也是性价比最高的二抗形式,这类抗体和IgG分子的重链和轻链都可以反应,也可以和其他的免疫球蛋白家族(IgMIgAIgD,IgE)和亚家族反应,因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链。 Anti-IgGFc fragment specific这类抗体和IgG重链的Fc部分反应,与F(ab’)2Fab无交叉反应,但可能与IgMIgA有交叉反应;而抗IgGFcγ fragment specific则只与IgG重链反应,通常不能和IgAIgM任何表位反应。 Anti-IgGF(ab’)2 fragment specific则与Anti-IgGFc fragment specific则正好相反。

      

         另外,与一个物种反应的二抗可能与其他物种发生交叉反应,除非这类抗体经过其他物种的血清蛋白吸附实验。如Jackson Horseradish Peroxidase-conjugated AffiniPure Mouse Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Rb Sr Prot) 小鼠抗山羊二抗,就是经过了小鼠、人、兔血清的吸附, 其与小鼠、人、兔血清内蛋白(包括免疫球蛋白)的交叉反应降到最低。 当其他物种免疫球蛋白的出现可能导致交叉反应时,推荐使用这类抗体。

 

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