一步法RT-qPCR试剂盒,让你的PCR一步到位

发布者:艾美捷科技发布时间:2020-05-12

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      随着新冠病毒肆虐全球,聊病毒是个敏感话题。今天我们就从这个敏感话题着手,好好聊一聊。

 

       病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA)。我们现在提起来就咬牙切齿的的新冠病毒(COVID-19),就是一种RNA病毒。当然除了COVID-19,我们常听到的其他臭名昭著之辈,如艾滋病病毒、流感病毒、登革热病毒、烟草花叶病毒、噬菌体等均属于RNA病毒。这些RNA病毒让之所以让我们谈虎色变,是因为很多RNA病毒具有非常强的侵略能力,会严重影响宿主生命活动。如何精准地检测到病毒(定性)?如何有效判定出样本中的病毒含量(定量)?借助分子生物学技术可以精准检测病原体,其中的一步法RT-qPCR技术可被广泛用于RNA病毒类型判定、病毒亚型判定、病毒定量及病毒突变体等方面,广泛用于食品安全、动物疫病、疾病诊断与治疗效果评估等临床与公共卫生等领域。

 

      一步法RT-qPCR(One-Step reverse transcription-quantitative PCR)用于以RNA为起始模板的定性和定量分析,将RNA逆转录合成cDNA的过程与靶标基因的PCR扩增于一管内依次进行,利用荧光来监控PCR扩增产物的变化,进而判断RNA初始量的技术即为一步法RT-qPCR技术。RT-qPCR根据化学发光原理可以分为两大类:一类为染料类,包括SYBR@Green I,通过荧光染料来指示产物的增加;一类为探针类,包括TaqMan@探针,利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加。

 

一步法RT-qPCR

 

       染料法:

      常用的SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,与双链DNA结合后,其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中,加入过量SYBR@Green 荧光染料,SYBR@Green荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR@Green染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

 

      作为全球最大的克隆供应商之一,GeneCopoeia提供的BlazeTaq™ One-Step SYBR® Green RT-qPCR kit是基于SYBR Green 染料法的Real Time One-Step RT-PCR反应试剂。试剂盒以RNA为模板,逆转录反应和定量检测可在同一反应管内完成,简化操作的同时可有效降低污染的风险。试剂盒包含了性能优异的逆转录酶,以及含有热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和必需的缓冲液成分混合而成的5×预混液。在逆转录酶作用下RNA逆转录成cDNA,并使用抗体修饰的Taq DNA聚合酶进行Real Time PCR反应,抗体的完全封闭有效避免了聚合酶在热循环反应前被激活。另外,经优化的Buffer体系大大提高了PCR反应的扩增效率和特异性,且检测灵敏度可达0.1pg总RNA,适用于各类型RNA模板的检测。

 

       一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂盒优势

 

      灵敏度高:可从低至0.1pg的RNA提取物中精确检测目标RNA。

      特异性强:有效抑制引物二聚体及非特异性扩增的产生。

      扩增效率高:在宽广的GC含量范围内能维持高扩增效率。

 

       一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂盒:

 

货号 名称 规格 描述
QP071 BlazeTaq One-Step SYBR Green RT-qPCR Kit (with ROX) 200rxn 新型real-time RT-PCR专用试剂,包含反转录酶、Hot-Start DNA聚合酶、经严格优化的反应buffer、dNTPs,以及 ROX参比染料
QP072 600rxn
QP073 1200rxn
QP081 BlazeTaq One-Step SYBR Green RT-qPCR Kit (200 rxn, w/o ROX) 200rxn 新型real-time RT-PCR专用试剂,包含反转录酶、Hot-Start DNA聚合酶、经严格优化的反应buffer、dNTPs
QP082 600rxn
QP083 1200rxn

 

一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂

 

 

一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂

 

      图3. 使用一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂盒,对HeLa细胞RNA提取物中GAPDH和Actin水平进行分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成7个样本,总量的范围为100 ng至0.1 pg,并设无模板对照(NTC组)。 A.GAPDH的扩增曲线(红色); B.Actin的扩增曲线(蓝色); C.GAPDH(红色)和Actin(蓝色)扩增片段的熔解曲线。

 

BlazeTaq™ One-Step SYBR® Green RT-qPCR kit

 

      图2. 一步法RT-qPCR染料法荧光定量试剂盒(红色)与Competitor T试剂盒(蓝色)产品的性能比较。对HeLa细胞RNA提取物中GAPDH和Actin水平进行分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成7个样本,总量的范围为100 ng至0.1 pg。 A.HeLa细胞提取物中GAPDH扩增曲线的比较; B.HeLa细胞提取物中Actin扩增曲线的比较。

 

       探针法:

 

      PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累,与标准曲线对比进行定量分析。

 

      作为全球最大的克隆供应商之一,GeneCopoeia提供的BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit是基于探针法的Real Time One-Step RT-PCR反应试剂。试剂盒以RNA为模板,逆转录反应和定量检测可在同一反应管内完成,简化操作的同时可有效降低污染的风险。试剂盒包含了性能优异的逆转录酶,以及含有热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和必需的缓冲液成分混合而成的5×预混液。在逆转录酶作用下RNA逆转录成cDNA,并使用热启动Taq DNA聚合酶进行cDNA扩增,在DNA扩增期间,与DNA上的靶点结合的靶特异性探针被Taq DNA聚合酶的5'-3'核酸外切酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,报告基团释放并发出荧光。

 

      一步法RT-qPCR探针法定量试剂盒:

 

货号 名称 规格 描述
QP076 BlazeTaq Probe One-Step RT-qPCR Kit ( with ROX) 200rxn 新型real-time RT-PCR专用试剂,包含反转录酶、Hot-Start DNA聚合酶、经严格优化的反应buffer、dNTPs,以及 ROX参比染料
QP077 600rxn
QP078 1200rxn
QP086 BlazeTaq Probe One-Step RT-qPCR Kit ( w/o ROX) 200rxn 新型real-time RT-PCR专用试剂,包含反转录酶、Hot-Start DNA聚合酶、经严格优化的反应buffer、dNTPs
QP087 600rxn
QP088 1200rxn

 

一步法RT-qPCR探针法定量试剂盒

 

       图1. 一步法RT-qPCR探针法定量试剂(红色)与Competitor P试剂盒(蓝色)产品的性能比较。使用BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit,对HeLa细胞RNA提取物中ACTB(A)、GAPDH(B)和B2M(C)水平进行分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成6个样本,总量的范围为10 ng至0.1 pg。

 

一步法RT-qPCR探针法定量试剂盒

 

      图2. 使用BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit,对HeLa细胞RNA提取物中ACTB(A)、GAPDH(B)和B2M(C)水平进行单通道和三通道分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成7个样本,总量的范围为100 ng至0.1 pg,结果显示,单通道和三通道的扩增效率相同。

 

 

      艾美捷科技有限公司,通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

      艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne、CytoNiche、Matreya LLC等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。免费电话:400-6800-868 电子邮件:sales@amyjet.com 网站:www.amyjet.com

 

                       三点:

                   企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

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                      艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。

                   六观:

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