IF/IHC背景太高？正常驴血清来助力

       想必各位实验达人对于免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）应该都比较熟悉了，在做免疫组化（IHC）或是免疫荧光（IF）实验过程中，高背景是我们经常遇见的问题，有的时候尽管我们进行了封闭操作，背景依旧居高不下。想当年我也曾经就被免疫荧光背景问题带来的恐惧深深支配过，别人做的免疫荧光的结果是这样的：

      我按照同样的步骤做的免疫荧光，只是没有染色DAPI，结果是这样的：

      我的细胞你在哪？（是不是上帝在我眼前遮住了脸，忘了掀开）

      直到某天我在艾美捷官网上浏览到关于IF实验产生背景的原因及降低背景的常用方法：

       IF降低背景：

       高背景是免疫荧光常见的问题，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次五分钟，推荐洗涤液为 PBS+0.05% Tween。

      我们实验室之前大多数都是使用BSA进行封闭，用正常血清代替BSA进行封闭倒是第一次听说，血清真的有如此奇效，我迫不及待的赶紧去尝试了一番，荧光背景确实显著降低了。

       什么是封闭血清（Blocking Serum=Normal Serum）？

      封闭血清是将饲养的非免疫的一切正常小动物取血，随后不用抗凝剂，凝血机制，血团收拢，溶解的浅黄色液体。历经独特处理工艺后的血清，非常适在各种免疫学实验中用以封闭解决， 例如：IHC、IF/ICC、ELISA等。

       血清作为封闭剂的原理：

      强烈建议在PBS中稀释至5％（v / v）的正常血清作为封闭剂，以减少免疫反应中非特异性，保守序列和/或Fc受体结合的背景。用稀释的正常血清与标记抗体来自同一宿主，可获得最佳结果，作为添加一级抗体之前的单独孵育步骤。

       用血清进行封闭效果好吗？

      封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭，可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。对于适用多抗的实验，选择二抗种属来源的正常血清是封闭处理的金标准。

       封闭血清如何使用？

      推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30min（或者室温1h），清除血清，不用洗涤，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

通过上面对封闭血清的介绍，您是不是有一种想立刻动手试一试的冲动呢? 心动不如行动，快来动手试一试吧，看看小艾给您介绍的降低背景小技巧对您的实验有没有帮助，相信您也可以做出漂亮的图片!

       封闭血清推荐：

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