您的细胞还好吗?细胞活性检测方法汇总!

发布者:艾美捷科技发布时间:2019-12-12

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        做细胞实验的亲们,经常需要对细胞的活性进行验证,如何知道自己研究的细胞是否还活着,活性怎么样? PCR、抗体IHC染色等细胞分析方法进行活性检测,由于只能反映某个时间点的细胞行为而具有局限性。当传统细胞分析方法无法获得预期结果时,使用实时细胞分析方法通常会得到很多新的生物学发现,因此活细胞分析技术在科研过程中发挥着越来越关键的作用。今天小艾来为您介绍一下我们常用的分析细胞活性的方法。

 

细胞活性检测

 

实验室细胞活性检测的常用方法有(包括活性检测和增殖检测):

· 化学发光法细胞活性检测

· 荧光染料细胞活性检测

· 细胞代谢检测

· 细胞计数检测(台盼蓝)

· DNA合成增殖

 

 

化学发光法细胞活性检

 

        腺苷三磷酸(ATP adenosine triphosphate)是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成,水解时释放出能量较多,是生物体内最直接的能量来源。ATP发光法,是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞活性及增殖的。常见的ATP发光法是利用外源萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生氧化反应而产生光子,通过监测光度来检测ATP含量,从而分析细胞活性与增殖。

 

        原理图:

 

化学发光法细胞活性检原理图

 

        优点:灵敏、快速、便捷、稳定,同时可以把ATP数量化,用相对光强度(RLU)来进行定量。


货号 产品名称 规格
13607 荧光标记的ATP-TAMRA conjugate [5-TAMRA-eda-ATP] 100 nmol
21601 Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒* 100Tests
21609 PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *温和发光* 1Plate
21610 PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光* 1Plate
21612 PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT - Free* 1Plate
17056 脱氧腺嘌呤5'-三磷酸酯 Aminopropargyl dATP 10 umoles
21617 PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒 100 Tests
21620 PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒 100 Tests

 

 

荧光染料细胞活性检测

 

        在所有现有的荧光染料中,荧光素二乙酸酯(FDA)及其衍生物(如CFSE)是非荧光分子,其扩散到细胞中并被细胞内非特异性酯酶水解以产生荧光。荧光产物仅在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生和积累,荧光产物会跟随细胞分裂,被平均分配到子细胞中。进一步可用流式细胞仪分析细胞分裂增殖的情况,还可以通过细胞完整性对活死细胞分别进行标记。

 

        优点:活体标记、简单、稳定、荧光时间长


货号 产品名称 规格
22022 活细胞荧光示踪探针CFSE 25mg
22020 活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐] 1g
22021 活细胞荧光示踪探针CFDA 100mg
22025 活细胞荧光示踪探针CDCFDA 100mg
22026 活细胞荧光示踪探针CDCFDA, SE 25mg
22789 Cell Meter 细胞活性检测试剂盒(活细胞/死细胞) *绿色/红色双重荧光* 200Tests

 

 

细胞代谢检测

 

        CCK-8检测是一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

        优点

                1.CCK-8法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解。

                2.线性范围更宽,灵敏度更高。

                3.对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。

                4.所用试剂在培养基中比 MTT 更加稳定,实验结果重复性好。

                5.MTT 具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。

 

 

细胞计数检测

 

        台盼蓝染料是一种重要的染色剂,可以将死组织或死细胞染成蓝色而具有完整细胞膜的活细胞或组织却不着色。 由于细胞在通过膜的化合物中具有很高的选择性,因此在活细胞中,台盼蓝不被吸收; 然而,它可以穿过死细胞中的膜。 因此,死细胞在显微镜下显示为独特的蓝色。

 

        优点:用于辨别区分死细胞和活细胞,以及检测细胞膜的完整性。

 

 台盼蓝染料


货号 产品名称 规格
2450 台盼蓝钠盐 细胞培养验证 100g
2452 台盼蓝钠盐 不含荧光杂质 10g
2453 台盼蓝钠盐 10 mM水溶液 10ml

 


 

DNA合成增殖

 

        BrdU是胸腺嘧啶的衍生物,常用于标记活细胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)这种掺入可以稳定存在,随着DNA复制进入子细胞中,BrdU的特异性抗原可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。


货号 产品名称 规格
17030 BrdU 细胞增殖检测试剂 CAS 59-14-3 25mg
17031 BrdUTP*10 mM溶于 TE Buffer*细胞增殖检测 CAS 102212-99-7 100ul

 

        美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。

 

        作为AAT Bioquest Inc.的中国区域代理,艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品,同时更为您售前售后全面技术支持。

 

 AAT Bioquest代理商艾美捷科技有限公司


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