IP利器,琼脂糖/磁珠偶联Flag标签抗体

发布者:艾美捷科技发布时间:2018-05-31

       什么情况下会选择标签抗体用于免疫沉淀呢?

 

       当某些目标蛋白没有对应的特异性抗体(eg.抗体所识别的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽,无法与目的蛋白相互作用或抗体选择不合适,所选抗体不能识别处于天然构象的蛋白)而无法进行免疫沉淀时,可以采用一个表位标记蛋白后,再选择针对此表位的标签抗体来进行免疫沉淀。

 

       什么样的标签适合用于免疫沉淀呢?

 

       Flag(DDDDK)标签是一个与重组蛋白相融合的由 8个亲水氨基酸(DYKDDDDK)组成的多肽片断。Flag标签只有8个氨基酸组成,因此它不会占据其他表位与结合域,避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点,Flag标签倾向于定位在融合蛋白表面,因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。

  琼脂糖&磁珠偶联的Flag标签抗体

 

       为什么推荐使用Flag标签抗体偶联的琼脂糖/磁珠?

 

       与使用Protein A/G琼脂糖的传统免疫沉淀(IP)方法相比,Abbkine的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体省去了Protein A/G与抗原-抗体复合物结合的步骤偶联抗体直接和目标蛋白结合后,通过离心或使用磁力架,将目标蛋白从细胞裂解液中分离出来。不仅让实验变得简单快捷,更可以避免非特异性结合,降低背景。表位标记蛋白的免疫沉淀可用于确定蛋白的细胞定位、研究翻译后修饰或检测标记蛋白与其它蛋白之间的相互作用。  

 

  •        看到这里,您肯定会问,Protein A/G的缺点是什么?
  1.        耗时:使用Protein A/G需要额外的孵育与洗涤操作
  2.        效果差:当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时,ProteinA/G和抗体结合能力弱
  3.        背景高:和样本中的其他免疫球蛋白结合,产生非特异性结合,导致高背景

 

       这就是艾美捷科技为您推荐琼脂糖/磁珠偶联Flag标签抗体的原因:  

 

产品名称 货号 应用
Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, 琼脂糖 A02010AGB IP
Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, 磁珠 A02010MGB IP

  琼脂糖&磁珠偶联的Flag标签抗体

 

       琼脂糖/磁珠偶联Flag标签抗体,优势更加突出:

 

  •        高特异性—高特异性单克隆标签抗体可实现高产量和高纯度免疫沉淀
  •        低背景—稳定、预封闭的填料及特异性抗体减少了免疫沉淀过程中的非特异性结合
  •        规格灵活:100ul, 400ul, 2ml,多规格可供选择。满足不同规模的免疫沉淀需求
  •        操作方便—产品说明书提供了免疫沉淀优化方案,一次免疫沉淀时间约1 - 2小时
  •        兼容性强—填料可以兼容手动及自动化操作

 

       琼脂糖/磁珠偶联Flag标签抗体使用说明:

 

  •        琼脂糖微球是多孔的,这使得它们具有高的表面积与蛋白质相互接触,并可以容纳大量的液体。在纯化大量蛋白的时候,传统的琼脂糖微球偶联抗体是IP实验的完美选择。(琼脂糖:每个样品加入20ul悬液)
  •        在IP实验中,由于所有的相互作用均发生在磁珠的外表面,并且磁珠的尺寸更均一,所以磁珠的可重复性和纯度通常高于琼脂糖。磁性分离不需要离心和多次洗涤,且孵育时间短,在日常小规模、快速处理多个样品的IP实验时,磁珠偶联抗体更简单、更快速。(磁珠:每个样品加入10-20ul悬液)
  •        提供形式:液体(抗体-琼脂糖/磁珠复合物:保护液=1:1,50%的悬浮液)
  •        储存方式:4°C可保存一年,琼脂糖偶联标签抗体避免冻融和涡旋;磁珠偶联标签抗体避免冻融和离心

 

       琼脂糖/磁珠偶联Flag标签抗体说明书

       琼脂糖偶联Flag标签抗体:https://www.abbkine.com/datasheet/A02010AGB.pdf

       磁珠偶联Flag标签抗体:https://www.abbkine.com/datasheet/A02010MGB.pdf

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