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AAT Bioquest/艾美捷丨链霉亲和素-Xtra? IF488方案

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-01-08     
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链霉亲和素偶联物广泛用于与生物素偶联物结合,以检测多种生物靶标,如蛋白质、核酸和其他分子。它们被用作许多生物检测的理想选择,如免疫荧光显微镜、流式细胞术、蛋白质印迹和其他生物应用,因为链霉亲和素具有很强的亲和力结合生物素,在很宽的pH值和温度范围内不受影响。

 

AAT Bioquest/艾美捷提供多种用经典荧光染料标记的链霉亲和素偶联物(例如:FITC、TRITC、Texas Red?、Cy3?、Cy5? 和 Cy7?),以及我们良好的水溶性、光稳定 iFluor 和 mFluor?? 染料。然而,传统的生物素-亲和素检测系统仍然受到现有荧光偶联物信号强度有限的限制。链霉亲和素 Xtra? iFluor 偶联物是一个新的超亮链霉亲和素偶联物家族,具有与 Alexa Fluor 荧光基团几乎相同的激发和发射特性,信号改善 3~5 倍。它是一套强大的工具,用于检测细胞成像或流式细胞术中的低丰度靶标。iFluor? 488 是 FITC 通道成像中非常常见的绿色荧光颜色之一。

 

AAT Bioquest链霉亲和素-Xtra? iFluor? 偶联物的合适标记程度可产生极为明亮的荧光链霉亲和素偶联物,用于在细胞成像、流式细胞术和蛋白质印迹应用中检测生物素化抗体。链霉亲和素-Xtra? iFluor 偶联物对低丰度靶标成像,比传统链霉亲和素 Alexa Fluor?? 偶联物具有更高的灵敏度和细节。

 

示例协议:

1、储备溶液的制备:

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环

链霉亲和素-Xtra? IF488储备溶液(1mg / mL)

向小瓶中加入 100 μL(对于 Cat# 46000)或 1 mL(对于 Cat# 46001)的 ddH 2 O,以制备 1 mg/mL 储备溶液。

注意:该构成的储备溶液将在含有 0.2% BSA 的 PBS 中。

 

2、工作溶液的制备:

链霉亲和素-Xtra?工作溶液

对于IF,建议的染色浓度为1-5 ug/ml。对于 FACS,染色缓冲液中的建议浓度为 0.1-0.5 ug / 100 uL / 百万个细胞。

注意:PBS+0.1%BSA可用作染色缓冲液。

注意:为了获得每种应用的合适的性能,需要仔细确定该试剂的最佳浓度。

注意:建议的工作稀释度仅供参考。建议用户在测试中使用适当的阳性和阴性对照滴定产品。

 

3、样品实验方案:

根据制造商的建议,用目标抗体封闭和处理样品。

在样品中以适当的浓度和持续时间加入生物素偶联的二抗工作溶液。

注意:请验证您的生物素偶联抗体与实验中使用的一抗的相容性和类型。例如,如果一抗是小鼠抗体,则可以使用与生物素结合的山羊抗小鼠抗体进行测定。

将细胞与链霉亲和素-Xtra? 工作溶液在室温下孵育 30 分钟至 1 小时。注意:需要仔细确定合适孵育时间。

取出工作溶液,将细胞重悬于您选择的缓冲液中。

使用荧光显微镜拍摄图像或使用流式细胞仪记录强度。

 

AAT Bioquest链霉亲和素-Xtra? IF488图像示例:

 AAT Bioquest

图 1. 用链霉亲和素-Xtra? iFluor 偶联物和链霉亲和素 Alexa Fluor? ? 偶联物染色的 Hela 细胞图像。

Hela 细胞用 4% 多聚甲醛固定 30 分钟,用 0.02% Triton? X-100 透化 10 分钟,用 1% BSA 封闭 1 小时。然后用 1 μg/mL α 微管蛋白小鼠单克隆抗体在室温下对固定的 Hela 细胞染色 1 小时,然后用 GxM IgG-生物素 (Cat# 16729) 染色,然后用链霉亲和素-Xtra? iFluor 488 和链霉亲和素-Alexa Fluor? 488 进行可视化。用 Hoechst 33342(蓝色,货号#17535)对细胞核进行染色。

 

艾美捷科技是AAT Bioquest的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。


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