PCR 反应管中调制反应液

实验室常用 DNA 聚合酶有三种： TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM 和Pyrobest TMDNA Polymerase。TaKaRa TaqTM 是一般的 DNA 聚合酶，保真性较差 ，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRa EXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA 聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的 PCR 产物 3’端附有一个 “A”碱基，如果希望直接将产物克隆 到 T-vector 可以用此酶。Pyrobest TM DNA

介绍组蛋白印迹的操作详细流程。

不同类型抗体储存时注意要避免污染或损失请每次均查看抗体说明书是否有特殊的保存要求。Abcam 公司对于非正确保存的抗体不保证其有效。对于保存适当的抗体，大多数的活性保持时间为数个月甚至数年。

酶联免疫吸附试验(ELISA)，流式细胞术，免疫沉淀(IP)，缓冲液配制方法见免疫印迹（western blot）部分，染色质免疫沉淀(ChIP)

8% 多聚甲醛溶液配制时应60°C 加热搅拌（温度不要超过60°C）。溶液达到60°C 时多聚甲醛溶解，加入500ml 0.2mM 磷酸盐缓冲液，使0.1mM 磷酸盐缓冲液中含4% 多聚甲醛。小心滴加1 当量的氢氧化钠溶液直至溶液澄清（每500ml 滴加1 至2 滴；如果仍未澄清，可继续滴加。或者，可在1 至2L 溶液中加入2 粒固体氢氧化钠）。溶液变冷后过滤。

三乙醇胺-吐温缓冲液（含0.1% 的吐温20）
配制1L 溶液：取100ml 10 倍三乙醇胺缓冲液加890ml 超纯水，再加入10ml 吐温20 (10%)吐温20 很粘稠会粘在量取的枪头上，要确定加入三乙醇胺缓冲液的变性剂体积足够。建议使用10% 的溶液进行配制，会比用未稀释的吐温20 溶液容易配制。

无特异性抗体对照时出现背景过高与蛋白A 或G 非特异性结合应采用预清除处理，即在加入抗体前，将裂解的样本与磁珠混合1小时然后分离使用。

染色质免疫共沉淀是一种强力的手段，来联系蛋白质或其修饰位点与基因组的关系。染色质分离并用特异性抗体判断是否与特异性DNA 序列相结合。染色质免疫沉淀法亦可用来检测目的位点在基因组中的时空分布（用芯片或DNA 测序）。本操作规程详细阐述了交联染色质免疫沉淀(X-ChIP) 实验的具体步骤。

离心后立即去除上清。沉淀中留有不溶性蛋白质，如果再次有悬浮发生，再次离心。

此方法涉及抗IgM 抗体的IgG 耦联蛋白A 或G 珠子（方法见下文）。这些珠子就可以在常规免疫共沉淀程序中使用IgM 抗体。通过结合抗-IgM 抗体，IgM 可以间接结合珠子。

为了使洗脱蛋白较少污染抗体，也为了更纯净蛋白质的制备和干净的免疫印迹实验，推荐将抗体与珠子交联。下面是一个实验程序举例（几个网站有关于这个程序有很多信息）。目标蛋白应该用温和的洗脱液洗脱，如甘氨酸缓冲液。